真菌毒素為真菌增殖時產(chǎn)生的次生有毒代謝產(chǎn)物。真菌的孢子能透過空氣、風力、水流和動物等方式來傳播。只要有少量蛋白質、淀粉、脂質及水分,真菌就能生長,因此谷物、果實類、玉米、花生、飼料及中藥材等都可能檢出真菌毒素。黃曲霉毒素具有潛在的肝毒害及致病性,其性質穩(wěn)定,因此易出現(xiàn)在食物鏈中。
應用方案概述:
本篇以FaTEx-gen快速萃取凈化柱進行前處理除雜,使用LC-MS/MS儀器分析谷類、花生、花生醬、豆類、飼料、中藥材等基質中的11種真菌毒素,包含黃曲du素類、赭曲du素A及鐮孢菌毒素類(伏馬毒素、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(嘔吐毒素)、玉米赤霉毒素等),外標法定量分析。
樣品制備流程如下:
秤樣2g左右,加入一定體積的樣品萃取溶液,高速震蕩機震蕩30分鐘,于3500rpm離心5分鐘,得到上清液。取一定體積的上清液加入FaTEx-gen 快速萃取凈化柱,收集全部濾液混勻。取一定體積的濾液,氮吹回溶后上機到LC-MS/MS分析。
Agilent 6470液相層析串聯(lián)式質譜儀搭配ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱,關于前處理詳細步驟和儀器分析條件,歡迎索??!
分析結果如表所示,回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi),CV%皆小于20,顯示此為一快速穩(wěn)定的檢驗方法。
實驗結果如下:
表1、真菌毒素11項藥劑之添加濃度
分析物 | 中文名稱 | 添加濃度(ng/g) |
Aflatoxin B1 | 黃曲mei素 B1 | 2.5 |
Aflatoxin B2 | 黃曲mei素 B2 | 2.5 |
Aflatoxin G1 | 黃曲mei素 G1 | 2.5 |
Aflatoxin G2 | 黃曲mei素 G2 | 2.5 |
Ochratoxin A | 赭曲霉毒素 A | 2.5 |
T-2 toxin | T-2毒素 | 5 |
HT-2 toxin | HT-2毒素 | 5 |
Deoxynivalenol | 嘔吐毒素 | 25 |
Zearalenone | 玉米赤霉烯酮 | 25 |
Fumonisin B1 | 伏馬毒素 B1 | 100 |
Fumonisin B2 | 伏馬毒素 B2 | 100 |
表2、谷類樣品中11項霉菌毒素之回收率和變異系數(shù)
中文名稱 | 英文名稱 | 黃豆 | 花生 | ||
CV% | R% | CV% | R% | ||
黃曲mei素 B1 | Aflatoxin B1 | 2.3 | 108.5 | 9.0 | 97.5 |
黃曲mei素 B2 | Aflatoxin B2 | 3.7 | 105.0 | 2.4 | 98.2 |
黃曲mei素 G1 | Aflatoxin G1 | 2.6 | 105.4 | 2.0 | 102.9 |
黃曲mei素 G2 | Aflatoxin G2 | 3.4 | 107.4 | 4.0 | 103.0 |
赭曲霉毒素 A | Deoxynivalenol | 4.8 | 100.3 | 1.6 | 103.9 |
T-2毒素 | Fumonisin B1 | 8.1 | 90.3 | 6.1 | 89.0 |
HT-2毒素 | Fumonisin B2 | 13.5 | 81.9 | 5.3 | 96.7 |
嘔吐毒素 | HT-2 toxin | 9.1 | 109.7 | 13.4 | 100.4 |
玉米赤霉烯酮 | Ochratoxin A | 2.8 | 101.9 | 3.8 | 106.0 |
伏馬毒素 B1 | T-2 toxin | 5.9 | 110.1 | 5.6 | 112.7 |
伏馬毒素 B2 | Zearalenone | 8.1 | 108.6 | 5.0 | 94.4 |
*重復性,n=3
結論:
1、本篇以FaTEx-gen SPE柱凈化樣品,采用液質質(LC-MSMS)的儀器分析方法,檢測谷類樣品(黃豆及花生)之多重霉菌毒素(黃曲mei素類、赭曲du素A及鐮孢菌毒素類)共11項,每次分析時間13分鐘,為快速準確的檢驗方法。
2、 FaTEx-gen萃取凈化柱可針對復雜檢體基質加強凈化,降低基質干擾。
3、 以FaTEx-gen柱檢測添加多重毒素標準品之谷類樣品(添加濃度:黃曲mei素B1 Aflatoxin B1,黃曲mei素B2 Aflatoxin B2, 黃曲mei素G1 Aflatoxin G1, 黃曲mei素G2 Aflatoxin G2,赭曲霉毒素 A Ochratoxin A:2.5 ng/g,T-2 toxin, HT-2 toxin:5 ng/g;嘔吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤霉烯酮 Zearalenone:25 ng/g;伏馬毒素 B1 Fumonisin B1,伏馬毒素 B2 Fumonisin B2:100 ng/g)回收率落在81.9~112.7%范圍內(nèi),變異系數(shù)皆小于20,為穩(wěn)定之檢驗方法。
4、 2015年藥典中的中藥材:根及根莖類:遠志;果實種子類:大棗、肉豆蔻、決明子、麥芽、陳皮、使君子、柏子仁、胖大海、蓮子、桃仁、檳榔、酸棗仁、薏苡仁;動物類:水蛭、地龍、全蝎、僵蠶。
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